Determinazione dei polifenoli
PREMESSA:
I polifenoli sono sostanze antiossidanti e se presenti in elevata concentrazione costituiscono un pregio per l’olio.Non sono previsti indici limiti di legge, ma il loro valore dà indicazioni sulla qualità del prodotto.
Sono composti della chimica aromatica con terminali ossidrilici, simili agli alcoli più semplici, in grado di attrarre atomi di ossigeno e fare con essi una reazione di ossido-riduzione, in modo da ridurre la capacità ossidante di questo ossigeno libero, o potenzialmente libero, che danneggerebbe, cioè invecchierebbe, cellule e tessuti.
L'analisi è eseguita con lo spettrofotometro UV

Materiale occorrente:
becker,agitatore magnetico,centrifuga,matracci da 25 ml,bilancia tecnica,cilindro da 25 ml,soluzione di Na2CO3 7,5%,soluzione di Folin Ciocalteau 1:10,miscela CH3OH/H2O 80:20,spettrofotometro UV,imbuto,beuta carta,da filtro.
Preparazione reattivo di Folin Ciocalteau:
questo reattivo puo` essere trovato in commercio,altrimenti puo` essere trovato nel seguente modo:sciogliere 100 g di tungstato di sodio (Na2WO42H2O) e 25 g di molibdato di sodio (NaMoO42H2O) in 700 ml di acqua distillata.
Aggiungere 50 ml di acido fosforico 85% e 100 ml di HCl 37%.Portare ad ebollizione in riflusso per 10 ore.Aggiungere poi 150 g di solfato di litio (Li2SO4H2O) poi mettere alcune gocce di bromo e portare nuovamente ad ebollizione per 15 minuti.Raffreddare e portare a 1dm3 con acqua distillata. Conservare in frigo.

Principio:
l’insieme dei composti fenolici viene ossidato dal reattivo di Folin Ciocalteau.

Questo e` costituito da una miscela di acido fosfotunstico (H3PW12O40) e acido fosfomolibdico (H3PMo12O40) che si riduce in una miscela di ossidi blu di tungsteno e molibdeno (W8O23 e Mo8O23), grazie all’ossidazione dei fenoli. La colorazione blu prodotta ha un massimo assorbimento intorno a 750 nm.


Metodica di analisi:
pesare circa 10 g di olio in un becker (segnare il peso esatto).Aggiungere 10 ml di miscela metanolo/acqua per estrarre i polifenoli dall’olio.Agitare per 30 minuti,aspettare 15 minuti e centrifugare.
Si formano 2 fasi e con il contagocce estrarre la fase superiore e metterla in un matraccio da 25 ml.Sull’olio rimasto aggiungere ancora 10 ml di CH3OH/H2O,agitare,centrifugare e riseparare la fase superiore mettendola nello stesso matraccio da 25 ml di prima.
Portare a volume con metanolo/acqua.Ghiacciare la soluzione,riportarla allo stato liquido e filtrarla per eliminare le eventuali tracce di olio rimaste.In un cilindro da 25 ml mettere 1 ml di filtrato,10 ml di soluzione di Folin Ciocalteau 1:10 e 9 ml di soluzione al 7,5% di Na2CO3 per creare l’ambiente basico.
Preparazione bianco:
10 ml di soluzione di Folin Ciocalteau 1:10,9 ml di soluzione al 7,5% di Na2CO3 e 1 ml di miscela metanolo/acqua. Lettura: aspettare 2 ore prima di eseguire la lettura a 765 nm.
Calcoli:
lo strumento esprime il risultato in mg acido gallico/dm3olio .Devo riportare in mg acido gallico/kgolio=(concentrazione in mgacido gallico/dm3olio *25)/peso olio(g) P.S.Gli standard per la retta di taratura devono essere fatti in un intervallo compreso tra 25 e 500 mg/l di acido gallico.
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