Esperienza di ESTRAZIONE in laboratorio;
monitoraggio con RADIELLO dell'aria di lavoro - risultati dell'analisi
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animazione esperienza di estrazione
Obiettivi:
Separazione dei pigmenti (clorofille,xantofille e caroteni) da materiale vegetale (spinaci), e monitoraggio di sicurezza dell'ambiente di laboratorio (solventi cicloesano e metanolo);
Esperienza:
- 1° fase: estrazione a freddo dei pigmenti mediante solventi organici;
- 2° fase: concentrazione e separazione dei pigmenti e analisi all'UV VISIBILE.
Materiali: imbuti separatori, cilindri graduati, imbuti, bacchette di vetro, spatoline, lana di vetro, mortaio;
Reagenti: materiale vegetale (spinaci, bietole, 5g circa) metanolo 30 ml, cicloesano 50 ml, cloruro di sodio, solfato di sodio anidro, acqua distillata 30ml.
SICUREZZA E PREVENZIONE: PIANO DI LAVORO
- monitoraggio dell'inquinamento da solventi dell'ambiente di lavoro con l'impiego del campionatore RADIELLO indossato da alcuni allievi; i risultati del campionamento sono riportati nell'apposita sezione.
- uso di dispositivi di protezione collettiva e individuale: cappe aspiranti; DPI, dispositivi di protezione individuale, camice, guanti.
- smaltimento dei rifiuti: i rifiuti prodotti risultano essere i solventi organici, la lana di vetro e il materiale vegetale
Procedimento
Estrazione pigmenti (1° fase)
Sminuzzare 5g di materiale vegetale in mortaio,porre 10 ml di metanolo e lasciare macerare alcuni minuti. Aggiungere altri 10 ml di metanolo e 25 ml di cicloesano. Mescolare bene. Filtrare su lana di vetro raccogliendo i solventi nell' imbuto separatore. Ripetere il trattamento estrattivo con 10 ml di metanolo e 25 ml di cicloesano. Filtrare nuovamente e scartare la fase alcolica inferiore. Nell' imbuto separatore aggiungere 30 ml acqua distillata ed agitare delicatamente. Se si forma una emulsione stabile, aggiungere un cucchiaio d di NaCI. Scartare la fase acquosa; versare il solvente residuo in una beuta ed aggiungere Na2SO4 anidro. Lasciare il tutto a riposo per 30 minuti, filtrare e ridurre il tutto ad un volume totale di 5ml circa.
Separazione dei pigmenti (2° fase)
In seguito i componenti dell'estratto vengono analizzati allo spettrofotometro UV visibile per visualizzare lo spettro di assorbimento delle clorofille.(VEDI SPETTRO )
In alternativa i componenti dell'estratto possono essere separati mediante cromatografia su strato sottile con eluente isoottano e acetone (15 minuti).
SPETTRO DI ASSORBIMENTO delle CLOROFILLE a e b con cicloesano + metanolo (bianco e autozero con cicloesano) - reidratazione dell'estratto con cicloesano - apparecchio analizzatore: Spettrofotometro UV VISIBILE (lunghezza d'onda tra 350 e 750 nm) .


SPETTRO di
ASSORBIMENTO
della CLOROFILLA

SOLUZIONE
CLOROFILLA
GREZZA


con CLOROFILLE
XANTOFILLE
CAROTENI


cromatografia su
strato sottile
INIZIO
FOTO DI ALCUNE FASI DELLA LAVORAZIONE